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封閉液小知識：ELISA實驗中的封閉液等常用試劑的配制
發(fā)布時間： 2016-08-31 點擊次數(shù)： 8797次我公司為您介紹ELISA實驗中的封閉液等常用試劑的配制。ELISA的試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點，蔗糖封閉的原理：
1、ELISA實驗中，蔗糖本身沒有封閉作用;
2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。
3、加蔗糖的主要目的是保護ELISA板子吸附(包被)的蛋白，起到“保護劑”的作用。
4、蔗糖溶液一般在ELISA板子經(jīng)過BSA封閉后加，當然也有將蔗糖加到封閉液中同時進行處理;那一種更好需要你實驗后來驗證。但多數(shù)選擇前者。
封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可)，0.4%的明膠，但是實驗表明前者比較好，后者不容易洗干凈未結(jié)合上的明膠。
封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結(jié)合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上，結(jié)合抗體或抗原的時候就不會產(chǎn)生非特異結(jié)合了，不會影響實驗的準確度。
tween的作用：雖然不能單獨封閉，但和BSA在封閉時會起到清洗非特異性結(jié)合或結(jié)合不牢固的蛋白的作用，假如抗體包被在板上會出現(xiàn)YY-
附件：ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置
ELISA實驗中是以抗原和抗體的免疫反應為基礎，ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實驗，把各種ELISA配置方法匯總?cè)缦拢?1) ELISA實驗包被緩沖液(2) ELISA實驗洗滌緩沖液(2) ELISA實驗洗滌緩沖液(3) ELISA實驗稀釋液;(4)ELISA實驗終止液(5)ELISA底物緩沖液(6)ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液(7) ELISA實驗ABTS使用液(8)ELISC。
ELISA的試劑盒(1) ELISA實驗包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):
NaHCO3 1.59克
NaHCO3 2.93克
加蒸餾水至1000ml
(2) ELISA實驗洗滌緩沖液(PH7.4 PBS)：0.15M
KH2PO4 0.2克
Na2HPO4·12H2O 2.9克
NaCl 8.0克
KCl 0.2克
Tween-20 0.05% 0.5ml
加蒸餾水至1000ml
(3) ELISA實驗稀釋液：
牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。
(4) ELISA實驗終止液(2M H2SO4)：
蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。
(5) ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):
0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml
0.1M 檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml
加蒸餾水50ml。
(6) ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:
TMB(10mg/5ml無水乙醇) 0.5ml
底物緩沖液(PH5.5) 10ml
0.75%H2O2 32μl
(7) ELISA實驗ABTS使用液:
ABTS 0.5mg
底物緩沖液(PH5.5) 1ml
3%H2O2 2μl
(8)ELISA實驗封閉液：
牛血清白蛋白(BSA) 5克
加洗滌緩沖液至100ml。
我司溫馨提示您：有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。
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