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實驗方式大起底
發(fā)布時間： 2017-03-27 點擊次數(shù)： 1621次ELISA試劑盒大起底
從樣品中分離提純同種試劑盒，是許多下游應用的關鍵一步，分離得到的細胞可以用于基因鑒定、大鼠小鼠ELISA試劑盒計數(shù)、生化分析、蛋白分離、宿主-病原體互作以及細胞間相互作用等研究。
一款合適的分離試劑盒可以說是實驗成功的保障，因為只有獲得正確的ELISA試劑盒，下游的分析結果才可能準確。目前，市面上有多種多樣的分離試劑盒可供選擇，它們的主要區(qū)別在于分離方法和篩選標志。那么，如何選擇自己的細胞分離試劑盒呢？希望本文能為你提供一些幫助。
正向選擇VS負向選擇
試劑盒分離試劑盒的工作原理主要有兩種，正向選擇和負向選擇。正向選擇的試劑盒直接結合的抗體來進行捕獲。這種抗體通常與磁珠相連，可以利用磁鐵將懸液中的抗體-磁珠-復合物提取出來，再通過二抗將磁珠與目標分開。負向選擇的試劑盒也采用類似的抗體包被磁珠，不過這種試劑盒是通過去除樣品中的非目的，來間接捕獲目的。
這兩種細胞分離試劑盒如何取舍，主要取決于目標細胞的表面是否具有特異性強的篩選標志。這樣的篩選標志能夠實現(xiàn)特異性的捕獲，避免所獲得的細胞被非目標細胞污染。如果你的目標細胞剛好具有這樣的篩選標志，那么正向選擇的細胞分離試劑盒就是*選擇。但如果目標細胞并不具有特異性強的篩選標志，那我們還是選用負向選擇的細胞分離試劑盒。
篩選標志的確定
通過PubMed等數(shù)據(jù)庫中的文獻，我們一般可以確定在目標上表達的篩選標志。如果文獻中找不到適合自己的表面標志，我們還可以用目標的DNA序列進行BLAST搜索。BLAST搜索結果會顯示，目標細胞上可能表達的表面標志，在此基礎上可以選取用于捕獲的細胞表面蛋白。舉例來說，對一個T進行BLAST搜索，結果會顯示該是否表達CD4或CD8。在得知目標表達CD4之后，我們可以先對樣品進行一個免疫實驗（如ELISA），以檢驗BLAST搜索的結果。一旦證實目標的確表達CD4，我們就可以用相應試劑盒來篩選CD4陽性的T細胞。
一般流程
對于一個旨在分離CD4陽性T的試劑盒來說小鼠ELISA試劑盒，操作流程主要有以下幾步。首先，將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠共同孵育，使抗體與CD4+ T結合。然后洗去不需要的非目標（即不表達CD4的），留下磁珠-抗體-復合物。ELISA試劑盒將上述復合物與能結合anti-CD4抗體的二抗一起孵育胞，形成磁珠-抗體-二抗復合物。我們可以用磁鐵去除這種磁珠-抗體-二抗復合物，而所有的CD4+細胞留在上清中。zui后，只需將上清轉移就可以進行下游研究了。- 上一篇：造成ELISA試劑盒實驗結果不樂觀的因素
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