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ELISA試劑盒試驗抗體的制備辦法
發(fā)布時間： 2018-06-12 點擊次數(shù)： 1850次ELISA試劑盒途徑的挑選決定于抗原的生物學(xué)特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物學(xué)活性抗原，通常不宜選用靜脈打針。
不一樣個別對共同抗原的反響性不一樣，并且不一樣抗原發(fā)生免疫反響的才能也有強有弱，因而常常在打針抗原的一起，參加能增強抗原的抗原性物質(zhì)，以影響機體發(fā)生較強的免疫反響，這種物質(zhì)稱為免疫佐劑。
免疫前取等容積*或不*佐劑與免疫原溶液混合，用振蕩器混勻成乳狀，也可以在免疫前取需求量佐劑置乳缽中研磨，均勻后再邊磨邊滴參加等容積抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再承繼研磨成乳劑，滴于冰水上5～10min內(nèi)*不渙散中止。
穿插反響率低，標(biāo)明抗血清的特異性好，反之則特異性差。
搜集的血液置于室溫下1h分配，凝集后，置4℃下，過夜（切勿冰凍）分出血清，離心，4000rpm，10min。
取兔血有兩種辦法，一是耳緣靜脈或耳動脈放血，二是頸動脈入血，也可心臟采血。加強免疫時用不*佐劑，初度免疫時皮下打針百日咳疫苗0.5ml，加強免疫時不用打針百日咳疫苗。
在無菌條件，吸出血清，分裝（0.05～0.2ml），貯于-40℃以下冰箱，或凍干后儲存。
取動脈或靜脈放血時，將兔放入一個特造的木匣或籠內(nèi)，耳露于箱（籠）外，也可由另一人抓住兔身。
防止扔掉抗原，亦可用一打針器裝抗原液，另一打針器裝佐劑，二者以聚乙烯塑料管聯(lián)接，然后二者往復(fù)重復(fù)抽吸，約數(shù)十分鐘后即能*乳化。
每2～3周加強免疫一次。
制作辦法：按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內(nèi)，用超聲波使之混勻，高壓滅菌，置4℃下保存?zhèn)溆谩?br />ELISA試劑盒特異性是以穿插反響率來標(biāo)明的。
ELISA試劑盒穿插反響率通常是用競賽按捺曲線來斷定的。
若用兔，用純種新西蘭兔，一組三只，兔的體重以2～3kg為宜。
家兔是zui常用以發(fā)生抗體的動物，因而這兒首要議論兔血的搜集。
頸動脈放血時，將兔仰臥，固定于兔臺，剪去頸部的毛，切開肌膚，暴露頸動脈，插管，放血。
不一樣濃度的抗原和近似抗原物質(zhì)別離做競賽按捺曲線，核算各自的聯(lián)絡(luò)率（B/T或B/B0），求出各清閑IC50時的濃度，按下列公式核算穿插反響率。二禮拜后，可在另一耳放血。
此法可重復(fù)屢次放血。
作免疫用的動物有哺乳類和禽類，首要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等，試驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。
在第2次加強免疫后2周，從耳緣靜脈取2～3ml血，制備血清，查看抗體效價。羊等較大動物以頸靜脈、動脈取血，鼠等小動物取血可參看有關(guān)資料。
剪去耳緣的毛，用少量二甲苯涂抹耳廓，30s后，耳血管擴大、充血。用手輕拉耳尖，以單面剃須刀或尖的手術(shù)刀片，靈敏切開動脈或靜脈，血液即流出，每次可搜集30～40ml。
抗原劑量，初度劑量為300～500μg，加強免疫的劑量約為初度劑量為1/4分配。
C冰箱保存。查看合格后即以其中一打針器作打針用。
佐劑除了延伸抗原在體內(nèi)的存留時間，添加抗原影響作用外，更首要的是，它能影響網(wǎng)狀內(nèi)皮體系，使介入免疫反響的免疫活性細(xì)胞增多，推動T細(xì)胞與B細(xì)胞的彼此作用，然后增強機體對抗原的細(xì)胞免疫和抗體的發(fā)生。
ELISA試劑盒未到達(dá)預(yù)期效價，需再進行加強免疫，直到滿意時中止。
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