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您知道有哪些對ELISA試劑盒測定結(jié)果有影響的原因嗎?
發(fā)布時(shí)間： 2019-08-15 點(diǎn)擊次數(shù)： 1864次ELISA試劑盒方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定，具有靈敏度高，操作簡單等優(yōu)點(diǎn)，但是在具體實(shí)驗(yàn)過程中影響因素較多，并且要按照嚴(yán)格的說明要求，在檢驗(yàn)中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常可見到一些錯(cuò)誤結(jié)果（即假陽性或假陰性結(jié)果）
影響ELISA測定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。
研域小編就標(biāo)本因素對ELISA測定的影響做如下總結(jié)。
一、類風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽性。
解決辦法
1.用F（ab）2替代完整的IgG；
2.標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效）；
3.檢測抗原時(shí)，可以用2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中，使RF降解。
二、補(bǔ)體
ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來，使C1q 可以將二者連接起來，從而造成假陽性。
解決辦法
1.用EDTA稀釋標(biāo)本；
2.用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
三、嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig（s） 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。
解決辦法
可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動物Ig（s），但加入量不足或亞類不同時(shí)無效。
四、嗜靶抗原的自身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果。
解決辦法
測定前需用理化方法將其解離后再測定。