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研域解析：酶聯(lián)免疫吸附法
發(fā)布時(shí)間： 2020-01-16 點(diǎn)擊次數(shù)： 2173次原理：可用于測(cè)定抗體，也可用于檢測(cè)杭原。其基本原理是采用抗原與抗體的特異反響將待測(cè)物與酶連接，然后通過酶與底物發(fā)生顏色反響，用于定量測(cè)定。酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定的對(duì)象可所以抗體也可所以抗原。3種必要的試劑：
①固相的抗原或抗體（免疫吸附劑）；
②酶符號(hào)的抗原或抗體（符號(hào)物）；
③酶效果的底物（顯色劑）。ELISA進(jìn)程包括：抗原吸附在固相載體上，這個(gè)進(jìn)程稱為包被，加待測(cè)抗體, 再加相應(yīng)酶符號(hào)抗體，生成抗原--待測(cè)抗體--酶符號(hào)抗體的復(fù)合物，再與該酶的底物反響生成有色產(chǎn)品。借助分光光度計(jì)的光吸收核算抗體的量。
依據(jù)檢測(cè)意圖和操作過程不同，有以下三種類型的常用辦法：
a、間接法
此法是測(cè)定抗體zui常用的辦法。將已知抗原吸附于固相載體。加人待檢標(biāo)本（含相應(yīng)抗體）與之結(jié)合。洗刷后，加人酶標(biāo)抗球蛋白抗體（酶標(biāo)抗抗體）和底物進(jìn)行測(cè)定。
b、雙抗體夾心法
酶聯(lián)免疫吸附法此法常用于測(cè)定抗原。將已知抗體吸附于固相載體，加人待檢標(biāo)本（含相應(yīng)抗原）與之結(jié)合。溫育后洗刷，加人酶標(biāo)板中。
c、競(jìng)爭(zhēng)法
此法可用于抗原和半抗原的定量測(cè)定，也可用于測(cè)定抗體。以測(cè)定抗原為例，將特異性抗體吸附于固相載體。參加待測(cè)抗原和一定量的酶標(biāo)已知抗原，使二者竟?fàn)幣c固相抗體結(jié)合；通過洗刷分離，zui后結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原與待測(cè)抗原含量呈負(fù)相關(guān)。