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血清影響ELISA實(shí)驗(yàn)假陽(yáng)怎么辦？
發(fā)布時(shí)間： 2023-09-19 點(diǎn)擊次數(shù)： 1650次人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF）可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽(yáng)性。要怎樣解決呢？請(qǐng)看以下操作。
①用F(ab)2替代完整的IzG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63C，10nin)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效);檢測(cè)抗原時(shí)，可以用2-疏基乙酸等加入到標(biāo)本稀釋液中，使RF降解。
(2)補(bǔ)體ELISA&系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過(guò)程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來(lái)，使C1q可以將二者連接起來(lái)，從而造成假陽(yáng)性。解決的辦法是:①用EDT8稀釋標(biāo)本;②用53，10nin或56C，30min加熱血清使C1q滅活。
(3)嗜異性抗體人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物(如鼠等)Ig(s)結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來(lái)，也能造成假陽(yáng)性。解決的辦法是:可在標(biāo)本稀釋液中加入過(guò)里的動(dòng)物Iz(s)，但加入里不足或亞類不同時(shí)無(wú)效。
(4)靶抗原的自身抗體抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在ELISA方法中均可干猶抗原抗體測(cè)定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn)，解決的辦法是:測(cè)定前需用理化方法將其解離后再測(cè)定。
(5)醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療，用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù)，均有可能使這些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體;另外，被鼠等嚙齒類動(dòng)物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig(s)抗體。這些病人ELIS測(cè)定時(shí)均可產(chǎn)生假陽(yáng)性。解決的辦法是:測(cè)定抗原時(shí)，在標(biāo)本中加入足里的正常鼠Ig(s)，從而克服由于上述原因造成的假陽(yáng)性。
(6)交叉反應(yīng)物質(zhì)類AFP樣物質(zhì)等，是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多抗測(cè)定抗原時(shí)對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大，但在用單克隆抗體測(cè)定抗原時(shí)，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對(duì)應(yīng)的靶決定簇時(shí)，也會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
(7)進(jìn)口ELISA試劑盒標(biāo)本中其它成分的影響血清脂質(zhì)過(guò)高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過(guò)大等，均對(duì)ELISA測(cè)定結(jié)果有干擾作用。