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小鼠ELISA試劑盒樣本處理五部曲
發(fā)布時(shí)間： 2015-07-03 點(diǎn)擊次數(shù)： 2773次小鼠ELISA試劑盒樣本前處理是酶聯(lián)免疫試驗(yàn)中關(guān)鍵的一步，稍有不慎將導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)滿盤(pán)皆輸，如何安全，快捷的處理樣本，樣本處理五部曲助您精彩實(shí)驗(yàn)。
1 均質(zhì)
組織樣本:肉、肝食品類(lèi)切細(xì)，用絞肉機(jī)反復(fù)絞碎，混合均勻。
水產(chǎn)樣本：去除樣品的非食用部分，食用部分切細(xì)，用均質(zhì)器均漿；原料表面較臟時(shí),需適當(dāng)用蒸餾水清洗。
蛋類(lèi)：鮮蛋去殼，蛋黃和蛋白充分混勻。
水果、蔬菜類(lèi)：先用水洗去泥沙，然后除去表面的水分，取食用部分。
2 振蕩提取
將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中，振蕩，使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組織內(nèi)部，提取待測(cè)組分。
2.1振蕩方式：振蕩器上進(jìn)行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。
2.2 在組織樣本中加入有機(jī)溶劑之間提取時(shí)，應(yīng)邊加邊振蕩，防止組織凝結(jié)成團(tuán)，不利于提取。
3. 在用有機(jī)溶劑提取過(guò)程中，如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，解決的方法有：①用細(xì)頭輕輕的攪拌，破壞乳化后，再重復(fù)離心。②再加入適量的提取劑，重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。
4 濃縮
由于凈化過(guò)程中引入的溶劑，可能會(huì)降低待測(cè)組分的濃度或者不適宜直接分析，需要去除全部有機(jī)溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮?dú)庀麓蹈桑?strong>小鼠ELISA試劑盒再用復(fù)溶液溶解干燥殘留物。
濃縮方式：
氮?dú)獯蹈沙s、壓縮空氣吹干除雜。
注意：
1在吹干樣本之前，用甲醇清洗針頭，防止雜質(zhì)干擾。
2在吹樣本時(shí)，針頭應(yīng)在液面上空，避免與樣本接觸，防止產(chǎn)生交叉污染。
3樣本吹干后應(yīng)立即取下，避免吹的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，影響zui終檢測(cè)結(jié)果。
4不同的藥物，吹干后樣本的保質(zhì)期不同，提倡待樣本回到室溫后立即復(fù)溶。
5 凈化
經(jīng)過(guò)提取的待測(cè)組分中通常含有一些會(huì)干擾試劑盒中抗原抗體反應(yīng)的雜質(zhì)或者是含有與待測(cè)物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)。將待測(cè)組分與雜質(zhì)分離的過(guò)程，我們稱(chēng)為試劑盒中樣本的凈化。在我們現(xiàn)有的試劑盒前處理方法中涉及到的zui常見(jiàn)的凈化是：液液分配法。
比如：用復(fù)溶液溶解干燥殘留物之前先加入適量的正己烷，在加入正己烷和復(fù)溶液渦動(dòng)后如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，可以60℃水浴加熱，至乳化現(xiàn)象消失或減弱后，加大離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心。溫馨提示Elisa實(shí)驗(yàn)使用注意事項(xiàng)：
1、小鼠ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2、濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4、請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔OD值的)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5、嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
6、本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
7、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9、底物請(qǐng)避光保存。