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做大鼠ELISA試劑盒的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
發(fā)布時(shí)間： 2015-11-19 點(diǎn)擊次數(shù)： 1986次本人在剛開(kāi)始做大鼠ELISA試劑盒時(shí)就面臨很多困難，雖然有師兄師姐鋪路，但還是常常做得一塌糊涂，比如說(shuō)花板，假陽(yáng)性，全顯色，全部顯色，顯色比空白還低。。。。。。自己也為此苦惱過(guò)很長(zhǎng)一段時(shí)間，隨著自己技術(shù)水平得提高，或多或少地也掌握了ELISA體系的脾氣，也是熟能生巧吧，現(xiàn)在做方陣，做ELISA已是輕車(chē)熟路了，以前檢測(cè)一種抗體用整整一下午還算得暈暈的，現(xiàn)在給我十個(gè)八個(gè)的從包被到顯色，一個(gè)工作日基本搞定。
下面就由我拋磚引玉地來(lái)說(shuō)一下:
1.正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說(shuō)明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、大鼠ELISA試劑盒兔血清或BSA等封閉。
2.在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:
（1）固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
（2）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。大鼠ELISA試劑盒蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg／ml。