造成血管生成素1（ANG-1）ELISA試劑盒失誤的原因

發(fā)布時間： 2015/10/9　　點擊次數(shù)： 840次

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下面分析血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法。
1 加樣可能原因： 1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣； 2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時）； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。解決辦法： 1）標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2）加樣后及時放入孵箱。 3）加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。 4）如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5）標(biāo)本較多時，請分批操作。
2 孵育可能原因： 1）孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 2）孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 1）貼封片或加蓋； 2）按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
3洗板可能原因： 1）采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2）采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 3）反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。解決辦法： 1）保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2）合理安排，或多用幾臺洗板機。
4 顯色可能原因： 1）顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 2）加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1）顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2）加樣時保持顯色劑不外流； 3） A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
5終止可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。

血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒收集樣品、處理及保存方法：
1. 血清：需使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，在操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心機離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000轉(zhuǎn) 離心機離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心機離心10分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

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